蛋白純化——His標簽與GST標簽知多少？
His與GST標簽特點，了解一下
海貍蛋白純化磁珠試用活動正在如火如荼進行中，在標簽蛋白純化過程中，合適的標簽不但有利于蛋白的純化，促進蛋白的可溶性，同時也不能影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用。小編今天和大家聊一聊主要的標簽蛋白——HIS與GST標簽特點。
HIS-Tag（組氨酸標簽）
HIS-Tag 由6-10 個組氨酸殘基組成，分子量不到0.84KD，通常插入在目的蛋白的C 末端或N 末端。HIS-Tag是目前原核表達最常用的標簽，蛋白純化完之后可以不需切除此標簽，也不會對蛋白產(chǎn)生功能影響。同時，蛋白純化步驟簡便，純化條件溫和，對蛋白也不會產(chǎn)生太大影響。HIS-Tag 蛋白純化的首選標簽。
HIS-Tag 本身的特性對目的蛋白沒有影響，不會形成二聚體；
分子量較小，只有0.84KD，對蛋白的下游應(yīng)用不會產(chǎn)生影響；
免疫原性低，可將純化的蛋白直接注射動物進行免疫并制備抗體；
HIS-Tag 與細菌的轉(zhuǎn)錄翻譯機制兼容，有利于蛋白表達；
可與其他標簽構(gòu)建雙標簽表達，可用于多種蛋白表達系統(tǒng)，純化條件溫和對蛋白影響較小。
海貍His-tag蛋白純化磁珠以磁性瓊脂糖微球為基質(zhì)，活化偶聯(lián)亞氨基二乙酸（IDA）,分別螯合鎳離子（Nickel）、鈷離子（Cobalt）兩種金屬離子，組氨酸殘基側(cè)鏈與金屬離子（鎳/鈷離子）有強烈吸引力，可通過磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白，海貍HIS-Tag蛋白純化磁珠純化蛋白純度高于85%。
GST-Tag 相對分子質(zhì)量較大，約為26KD，插入在目的蛋白的C 末端或N 末端，大腸桿菌中常用在N 端。GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 蛋白本身是一個在解毒過程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶。一般選擇GST 標簽的目的有兩個，一是提高蛋白表達的可溶性，二是提高蛋白的表達量。蛋白表達純化結(jié)束后需根據(jù)不同的蛋白應(yīng)用而確定是否切除標簽，標簽較大，切除與否需根據(jù)下游應(yīng)用考慮。如果要去除GST 融合部分，可用位點特異性蛋白酶切除。檢測方法可用GST 抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。
增加外源蛋白的可溶性；
可在不同的宿主中表達，適用范圍廣；
可用不同的蛋白酶可以方便去除；
很好保留了蛋白的抗原性和生物活性，提高外原蛋白的穩(wěn)定性；
高特異性，純化方便且溫和；
分子量較大，可能會影響蛋白質(zhì)的功能和下游實驗；
如果蛋白不可溶，很難用變性的方法純化。
海貍GST融合蛋白純化磁珠，通過磁珠偶聯(lián)谷胱甘肽(GSH)，利用谷胱甘肽與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶之間酶和底物的特異性作用力，分離出帶有GST標簽的蛋白，純化蛋白的純度達到90%。
海貍磁珠法蛋白純化
無需對粗蛋白樣品進行復(fù)雜預(yù)處理
無需要昂貴的層析設(shè)備
節(jié)省時間，降低成本
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